آزمون سمیت سلولی MTT 

تست MTT به عنوان تستی برای بررسی میزان زنده مانی سلول یا بررسی اثر سمیت دارو ها یا دیگر مکمل ها بر سلول است که با تاثیر بر روی اندامک های درون سلولی می تواند بین سلول زنده و مرده تمایز قائل شود.

فعالیت و سرعت تکثیر سلول ها ممکن است تحت تاثیر هورمون ها، فاکتورهای رشد، سایتوکاین ها و میتوژن ها افزایش داشته باشد یا تغییری نکند. همینطور بعضی از داروها و عوامل سایتوتوکسیک مثل داروهای ضد سرطان ممکن است باعث نکروز یا آپوپتوز سلول‌ها یا کاهش سرعت تکثیر و رشد و یا از بین رفتن ساختار سلول ها شود.

MTT assay يک روش رنگ سنجی است که بر اساس احیا شدن و شکسته شدن کریستال های زرد رنگ تترازولیوم به وسیله ی آنزیم سوکسینات دهیدروژناز و تشکیل کریستال های بنفش رنگ نا محلول انجام می شود. در این روش برخلاف سایر روش ها مراحل شستشو و جمع آوری سلول که اغلب باعث از دست رفتن تعدادی از سلول ها و افزایش خطای کار می شود، حذف شده و تمام مراحل آزمایش از ابتدای کشت سلول تا خواندن نتایج با فوتومتر و همچنین تفسیر این تست در یک میکرو پلیت انجام می شود، بنابراین تکرارپذیری، دقت و حساسیت آزمایش بالاست .

آزمون سمیت شناسی MTT یکی از روش های مطالعه میزان سمیت مواد بر روی سلول ها به صورت برون تنی (In-Vitro) است. در این روش سلول ها پس از کشت در آزمایشگاه با مواد اصطلاحاً تیمار شده تا میزان سمیت آنها بررسی شود. نتیجه به این صورت است که برای هر غلظت از ماده میزان زنده بودن سلول ها مشخص خواهد شد. این روش با اینکه اساساً برای محلول ها و ترکیبات محلول در آب است ولی امروزه برای دیگر ترکیبات حل شونده در حلال های آلی و نانوذرات نیز قابل انجام است. این روش پرکاربردترین روش برای بررسی سمیت مواد و فرمولاسیون ها است. این سمیت می تواند بر روی رده های سلول های غیرسالم مانند سلول های سرطانی جهت مطالعه داروها و یا بر روی سلول های سالم جهت ایمن بودن ترکیبات مورد استفاده قرار گیرد.

آزمایش MTT یک آزمایش کالریمتریک جهت ارزیابی فعالیت متابولیک سلولی است. آنزیم اکسیدوردوکتاز سلولی وابسته به NADPH منعکس‌کننده تعداد سلول‌های زنده ای که قادر به احیاء رنگ تترازولیوم برماید محلول به رنگ بنفش فورمازان نامحلول است، میباشد. ترکیب فورمازان در دی متیل سولفواکساید (DMSO) محلول است. ازآنجایی‌که سلول‌های مرده قادر به تبدیل MTT به فورمازان نیستند، سطح فورمازان ایجادشده متناسب با تعداد سلول‌های زنده می‌باشد. شدت رنگ ایجادشده با الایزا ریدر خوانده می‌شود.

پاسخ آزمون سمیت شناسی

یکی از روش های مرسوم و سریع برای سنجش میزان سمیت داروها، روش MTT است که اساس آن تشکیل رنگ فورمازان به دلیل احیای ترکیب MTT (دی متیل تیازول – ۲ و ۵ دی فنیل تترازولیوم برمید) و یا دیگر نمک‌های تترازولیوم است. با گسستگی حلقه تترازولیوم از طریق آنزیم‌های میتوکندریایی در سلول‌های زنده، بلورهای فورمازان غیر محلول تشکیل می‌شود که بنفش رنگ می باشند. ایجاد این بلورها حاکی از فعال بودن آنزیم‌های زنجیره تنفسی و معیاری برای زنده بودن سلول‌ها است. با اندازه گیری میزان جذب توسط اسپکتوفتومتر در طول موج‌های معین می‌توان درصد سلول‌های زنده  مانده را مشخص کرد. این درصد به صورت محاسبه می شود:

۱۰۰ × جذب متوسط نمونه‌های کنترل / جذب متوسط نمونه‌های تیمار شده = درصد سلول‌های زنده

در این آنالیز مشخص کردن پارامترهای زیر قبل از انجام آزمون ضروری است:

• زمان تیمار: عموما در زمان های ۲۴، ۴۸و ۷۲ ساعت
• رده سلولی مورد مطالعه: نرمال یا سرطانی
• تعداد سلول های کاشته شده در هر خانه از پلیت
• روش آماده سازی نمونه و استریل کردن آن‌ها

شرایط خاص و نکات مهم در ارسال نمونه

هزینه آزمون برای هر نمونه و برای تنها یک زمان خوانش (24 یا 48 یا 72 ساعت) است. در صورت درخواست برای زمان‌های تیمار بیشتر، درصدی به هزینه انجام  اضافه می شود. نمونه مورد نظر باید محلول در آب و شرایط استریلیزاسیون آن مشخص باشد. در غیر این صورت آزمایشگاه با آماده سازی نمونه را انجام می دهد.

انجام آنالیز های آماری نتایج بنا به درخواست متقاضی با هزینه جداگانه می باشد.

مدت زمان انجام آزمون: 28 روز کاری

توجه : 

• خواهشمند است با توجه به محدودیت‌های نگهداری نمونه‌ های حوزه زیست فناوری قبل ارسال نمونه از جهت شرایط نگهداری و قایل انجام بودن با آزمایشگاه هماهنگ بفرمایید .
• خواهشمند است قبل از ارسال نمونه های خود به آزمایشگاه تابان، فرم مخصوص هر آنالیز را از بخش فرم ها دانلود و پس از تکمیل همراه با نمونه برای پذیرش آزمایشگاه ارسال بفرمایید.

مشخصات دستگاه :

نام دستگاه : Eliza Reader

نمونه جواب :

گراف زیر یک نمونه از جواب آنالیز mtt می باشد .